ERISIPELA PORCINA: La Enfermedad Olvidada.II

cerdos-chicos-ad

DE HARO-CRUZ MARÍA DE JESÚS.
Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas-IPN.

GUTIÉRREZ-PAREDES S.
Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas-IPN.

GUERRA-INFANTE FM.
Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas-IPN.
Laboratorio de Virología del Instituto Nacional de Perinatología.

CAMPOS MORALES E. MORENO GÓMEZ E.
Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias-UDG.

Detección de Erysipelothrix rhusiopathiae Asociado a Endocarditis y Abortos en Cerdos de Tres Granjas Porcinas Cercanas a Guadalajara, Jalisco.

Resultados del análisis de muestras obtenidas de cerdos de diferentes edades en el Rancho experimental Posta Porcina Cofradía.

Dándole seguimiento a los casos de Erisipela que se presentaron en otras granjas aledañas y en esta posta porcina se estableció el proyecto de la producción de una bacterina o un producto biológico que sirviera como preventivo para este problema infeccioso, aprovechando la experiencia del equipo interdisciplinario que se integró entre el IPN (E.N.C.B) y la U de G (CUCBA).

El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de Erysipelothrix rhusiopathiae en muestras de cerdos, y procurar tener cepas que sirvieran como semillas de producción para una bacterina o vacuna inactivada para la prevención de la enfermedad.

Esto es dado por la necesidad de contar con un producto que confiera una mayor duración de los anticuerpos y que sean más específicos, ya que como se observa en los resultados obtenidos hay una diversidad antigénica en las diferentes cepas de Erysipelothrix rushiopathiae aisladas que se obtuvieron de muestras de tonsilas, corazón, hígado, bazo y líquido de articulaciones de tres cerdos rendidos que se llevaron a matanza, estas muestras se sembraron en medios de cultivo selectivos y en medio gelosa sangre para el primo aislamiento de la bacteria.

En dichas muestras se encontraron los resultados indicados en el cuadro 1:

  Muestra Microorganismo aislado
Cerdo 1 Bazo Pasteurella multocida
Tonsilas Erysipelothrix rhusiopathiae
Erysipelothrix tonsilarum
Hígado Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Corazón Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Articulaciones Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Cerdo 2  Bazo Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Tonsilas Erysipelothrix rhusiopathiae
Erysipelothrix tonsilarum
Hígado Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Corazón Erysipelothrix sp.
Articulaciones Erysipelothrix sp.
Cerdo 3 Bazo Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Tonsilas Erysipelothrix rhusiopathiae
Erysipelothrix tonsilarum
Hígado Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Corazón Sin aislamiento de colonias sospechosas de Erysipelothrix sp.
Articulaciones Sin aislamiento de colonias de Erysipelothrix sp.

Además de estas muestras se identificó a Corynebacterium pseudotuberculosis, Listeria monocytogenes y Pasteurella multocida.

Con los microoorganismos aislados se preparó un cultivo de cada uno de ellos y se hizo la inoculación de ratones con dichos cultivos, encontrándose el aislamiento de Pasteurella multocida y de Erysipelothrix sp.

Se obtuvieron también muestras de sangre, las cuales se inocularon en caldo MBA (caldo BHI adicionado con azida de sodio y suero de caballo). Se incubaron a 37°C por 2 semanas y se monitoreo el crecimiento cada tercer día. Sin embargo a partir de estas muestras no se logró el aislamiento de la bacteria.

dat-1

Se realizó la presencia de anticuerpos en el suero de 20 animales, encontrándose que en 18 la presencia de anticuerpos contra Erysipelothrix, mediante la técnica de aglutinación en placa. Se está esperando un kit para la detección de anticuerpos por la técnica de ELISA, el cual es más sensible y específico para la prueba.

Las cepas aisladas como E. rushiopathiae se les realizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa para comprobar la especie y que no fueran E. tonsilarum. De estos aislamientos uno amplificó los fragmentos esperados, el de 2200 pb específico de E. rushiopathiae y el de 789 pb específico del género Erysipelothrix sp. Uno de estos aislamientos amplificó sólo el de 789 pb por lo que se identificó como E. tonsilarum (figura 1). Los demás aislamientos no se pudieron caracterizar por esta técnica debido a la baja cantidad de material genético que se obtuvo, sin embargo en este momento se está estandarizando la técnica de extracción de DNA para caracterizar los aislados.

dat-2

Finalmente se realizó la inactivación de 3 cepas identificadas como E. rushiopathiae utilizando timerosal. Se dejó actuar el timerosal por 1 día a 37°C, se eliminó el timerosal del cultivo bacteriano mediante lavados con solución salina y se ajustaron al tubo 5 del nefelómetro de Macfarlan, como adyuvante se adicionó aceite mineral.

Esta suspensión bacteriana se inoculó a tres ratones por vía intramuscular con 0.1 ml y se monitorearon por 7 días, posteriormente se realizó una segunda inoculación con 0.1 ml y se dejaron 7 días más. Como testigo se tuvieron 2 animales que se mantuvieron sin inocular. Pasado este tiempo, todos los animales se retaron con una suspensión de bacterias vivas y se monitorearon por 5 días.

Los animales problema mostraron signos de decaimiento tres días después del reto, sin embargo se recuperaron y se mantuvieron en peso y talla.

A los 7 días los animales se sacrificaron y se tomó muestra de sangre para monitorear presencia de anti- cuerpos.

Los animales testigo mostraron signos de letargo, erizamiento de pelo, y conjuntivitis. A la necropsia se observó hígado hemorrágico y esplenomegalia.

dat-3

Los animales vacunados no mostraron lesiones aparentes.

El título de anticuerpos en los ratones vacunados mostró títulos de hasta 1:32 por medio de la técnica de aglutinación en placa, los ratones testigo fueron negativos a la presencia de anticuerpos por esta técnica.

Hasta el momento, los resultados preliminares de las muestras analizadas se observan en el anexo fotográfico de la necropsia realizada a los animales vacunados y sin vacunar.

dat-4

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

  • Shimoji Y, Yokomizo Y and Mori Y. (1996). Infection and Immunity. 64: 1789-1793.
  • Yamazaki Y. (2006). Journal Veterinary Diagnostic Investigation. 18: 384-387.
  • To H., Sato H., Tazumi A., Tsutsumi N., Nagai S., Iwata A. and Nagano T. (2012). Journal Veterinary Medical Science. 74: 949-953.
  • To H. and Nagai S. (2007). Clinical Vaccine Immunology. 14: 813-820.
  • Harada K., Uchiyama M., Hoshi T. and Takahashi T. (2009). Journal Veterinary Diagnostic Investigation. 21: 354-358.

Artículo publicado en
Los Porcicultores y su Entorno 118