Correlación entre el grado de aglutinación y su lectura de concentración en semen de cerdo utilizando tres métodos analíticos

Karla Berenice Muñoz Álvarez
Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia.
Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CUCBA).
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RESUMEN

El análisis rápido de muestras de semen en centros de producción de dosis para inseminación porcina ha impulsado el desarrollo de nuevos métodos. Sin embargo, ciertas condiciones de los eyaculados aún requieren la habilidad del operador para mayor precisión. Este estudio evaluó la utilidad de sistemas rápidos para determinar la concentración en eyaculados aglutinados, utilizando cuarenta muestras de cerdos sometidos a estrés calórico y osmótico para lograr tres grados de aglutinación. Las muestras se analizaron con tres métodos: hemacitómetro tradicional, espectrofotómetro y sistema asistido por computadora (CASA). Se estableció una correlación entre el grado de aglutinación y la lectura de concentración por los tres métodos, determinando la semejanza o discrepancia entre ellos.

INTRODUCCIÓN

La especie porcina es una de las que alcanza mayores incrementos de población debido al número de crías por parto y partos por año, siendo así éstos de alta productividad, la misma que depende del manejo al que son sometidos para llegar a tal rendimiento óptimo (Valle Rodríguez, 2017).  El proceso reproductivo en la producción porcina, incluyendo la inseminación artificial, es crucial para asegurar la rentabilidad y el abastecimiento de carne fresca. La calidad de la dosis seminal, afectada por condiciones como la aglutinación, requiere un análisis preciso.

Este estudio evaluó métodos para determinar la concentración de espermatozoides en eyaculados aglutinados, utilizando hemacitómetro, fotómetros y sistemas CASA. Se estableció una correlación entre el grado de aglutinación y la lectura de concentración por los tres métodos, destacando la importancia de un monitoreo adecuado para asegurar la rentabilidad y eficiencia en la producción porcina. Poniendo así en práctica los diferentes métodos para ver cada uno de sus resultados de los parámetros que permitieron predecir y determinar el grado de calidad del gameto, las variables que permiten inferir la calidad y bienestar de la célula espermática son: movilidad, integridad de la membrana plasmática, concentración de nucleótidos (metabolismo energético), actividad mitocondrial, integridad de ADN, morfología y tasa de fertilización mencionan los autores (Fabricio & Vera, n.d.).

Dado que dichos parámetros que se evaluaron como el determinar la aglutinación, la calidad y el conteo de espermas es importante para conocer el número de espermatozoides por eyaculado, ya que de este parámetro depende el número de hembras a inseminar y que cada cría salga normal, ya que se estima que por cada parto haya camadas de 11 a 12 lechones nacidos vivos. Otro de los parámetros importantes es evaluar el porcentaje de espermatozoides móviles, así como el tipo de movimiento que presentaba la media de una población espermática.

Estas medidas ofrecen una descripción general de la motilidad espermática, pero la exactitud y precisión están limitadas por las condiciones del sistema de medida como el fotómetro y el sistema CASA ya que por el concentrado de aglutinación hace que sea más erróneo su conteo. Esperando así que con el método de análisis manual obtener medidas correctas de la motilidad espermática que proporcionen información precisa acerca de su estado funcional.

DESARROLLO

Los grandes centros de producción de semen de cerdo en México y el mundo. La producción porcina actual, está cada vez más influenciada por criterios de calidad. Por medio de la adopción de los sistemas de calidad y buenas prácticas de producción, se pueden disminuir los riesgos para la salud animal y humana. Factores relacionados con la sanidad de los animales, seguridad alimentaria, criterios medioambientales y normas de bienestar animal, son cada vez más valorados por los consumidores y, por tanto, incluidos en los criterios de producción para generar mayor confianza en el producto final (Baes Lougan M., 2017).

La evaluación del semen

La valoración de la calidad espermática se considera de vital importancia, ya que permite decidir sobre el uso del eyaculado a los efectos de la IA; si bien la evaluación depende en gran parte de la subjetividad del evaluador, tiene alto valor de predicción, por cuanto se ha demostrado que existe una estrecha relación entre evaluación y fertilidad. De las múltiples pruebas que se realizan actualmente, ninguna por sí sola tiene valor absoluto, a excepción de los casos extremos de esterilidad; por ello, solo de la adecuada interpretación de las diversas pruebas pueden obtenerse conclusiones válidas que garanticen la posibilidad de éxito de la fecundación (Ciap, 1987).

VOLUMEN: McKenzie (1938) sostiene que el volumen normal del eyaculado de un verraco adulto varía de entre 125 a 500 ml con un promedio de 200 ml. Sin embargo, en ocasiones se puede obtener eyaculados de 700 a 800 ml.

MORFOLOGÍA: Los resultados de estas pruebas no muestran relación con la fertilidad, pero permiten identificar reproductores con semen de baja calidad, con base a lo cual se descartarían como sementales utilizados en la reproducción (Valle Rodríguez, 2017).

MOTILIDAD: La observación de la motilidad espermática debe efectuarse inmediatamente después de la recolección, por cuanto puede ser afectada por factores exógenos como excesivo calor, luz, frío, agentes químicos o extraños. El primer eyaculado después de un largo período de inactividad sexual tiene baja motilidad y elevado número de espermatozoides muertos (Roberts, 1971). La técnica a seguir para evaluar la motilidad se basa en determinar el tipo de movimiento del espermatozoide en el eyaculado. La clasificación de 0 a 5 comprende desde los espermatozoides inmóviles (0) hasta aquellos con movimientos progresivos muy rápidos (5).

Concentración

La concentración expresa el número de espermatozoides por centímetro cúbico. La técnica empleada consiste en hacer una dilución 1/100 en una solución de cloruro de sodio al 0,99%. La lectura se realiza utilizando un microscopio con objetivo y otros métodos, tales como el espectrofotómetro, hemacitómetro o el sistema CASA. Aglutinación de semen

Cuando se realiza el análisis microscópico del semen, se observa si existen espermatozoides móviles adheridos entre sí, lo que se denomina aglutinación espermática. Clasificación y tipos de aglutinación En función de este parámetro seminal, el resultado del estudio del semen debe indicar si la muestra presenta:

AGLUTINACIÓN POSITIVA: lo que significa que se han observado espermatozoides móviles pegados entre sí formando agrupaciones.

AGLUTINACIÓN NEGATIVA: los espermatozoides móviles no están adheridos en la muestra de eyaculado analizada. Esta unión de espermatozoides móviles puede ser cabeza con cabeza, cola con cola o, incluso, mixta. Grados de aglutinación

•Existen diferentes grados de aglutinación espermática, según el número de espermatozoides adheridos:

• Grado 1: Hay menos de 10 espermatozoides por aglutinación y muchos espermatozoides libres.

• Grado 2: Cada aglutinación está formada por 10-50 espermatozoides, pero hay espermatozoides

• Grado 3: Las aglutinaciones están formadas por más de 50 espermatozoides y hay algún espermatozoide libre.

• Grado 4: Todos los espermatozoides están aglutinados y las aglutinaciones se encuentran interconectadas. ¿Aglutinación o agregación? Si bien es verdad que la aglutinación y la agregación de los espermatozoides pueden parecer lo mismo, existen diferencias entre ambos conceptos.

• Aglutinación. Si se han unido espermatozoides móviles entre sí.

• Agregación. Si se han unido espermatozoides inmóviles entre sí, o espermatozoides móviles a moco, a otras células o a restos celulares.

Efectos

Mientras haya más aglutinación en el semen del cerdo menor probabilidad de que los espermatozoides tengan movilidad, vitalidad y buena calidad, lo cual nos daría la respuesta de que no se tenga una buena respuesta al momento de la fecundación, lo cual afecta de manera importante a la industria productiva (Cortez, S, Azana, 2021).

Espectrómetro

El espectrofotómetro es un instrumento que permite proyectar un haz de luz a través de una muestra y medir la absorbancia (la cantidad de luz absorbida por la muestra) o la transmitancia (la cantidad de luz que pasa a través de la muestra, es decir, el recíproco matemático de la absorbancia). La cantidad de luz absorbida o transmitida a una determinada longitud de onda es proporcional a la concentración del material. Si el material no absorbe luz por sí mismo, se puede mezclar con otros reactivos para obtener, mediante una reacción química específica, una solución que sí absorba luz.

Análisis de semen asistido por computadora

El uso de los sistemas computadorizados va posicionándose como una herramienta para el análisis seminal, por su velocidad de análisis (especialmente en la valoración de la concentración y la movilidad), su reducido coeficiente de variación de tipo técnico, la capacidad de cuantificar parámetros de otro modo relativos a clases como por ejemplo: rápido, rápido progresivo, normal, estático, así como la fácil capacidad de almacenamiento de la información y la posibilidad de introducir técnicas estadísticas de análisis poblacional.

Los resultados e informes que se generan en los centros de inseminación artificial y/o reproducción asistida, deben provenir de sistemas fiables y objetivos que garanticen una confiabilidad de los datos reproductivos (MORTIMER, 2000). La principal característica de estos sistemas es la sustitución del análisis tradicional realizado por un técnico de laboratorio; por ejemplo, el espermiograma clásico; por un tipo de sistema informático artificial. Esto involucra aspectos tanto del soporte (hardware) como de la programación asociada (software) que unifica los diversos sistemas CASA, pero también lo que los distingue.

Procedimientos experimentales:

El semen fue recolectado por el método de mano enguantada y fue empacado y remitido de manera inmediata para su procesamiento en el laboratorio (dentro de los 15 minutos siguientes a su recolección).

• Una muestra del eyaculado se evaluó en el lugar de colección y las características de volumen, concentración, motilidad y morfología fueron registrados junto con la identificación del individuo.

• Una vez en el laboratorio universitario, cada eyaculado fue dividido en cinco alícuotas las cuales se sometieron a diferentes grados de estrés (calórico u osmótico) para provocar tres diferentes niveles de aglutinación (grado 1, 2 y 3) de acuerdo con el manual de la Organización Mundial de la Salud (WHO)

• Un arreglo factorial 3×3 se utilizó para probar los tres métodos de concentración (hemacitómetro, espectrofotómetro y CASA) en los tres niveles de aglutinación (grados 1, 2 y 3).

• De cada muestra se registraron cuatro lecturas: Nivel de aglutinación, concentración por sistema CASA, concentración por espectrofotómetro y concentración por hemacitómetro, las cuales fueron organizadas y registradas inicialmente en una hoja de Excel.

Análisis de los resultados:

Un coeficiente de correlación linear de Pearson se utilizó para establecer la relación entre el nivel de aglutinación y la concentración mediante los tres métodos establecidos. La significancia se estableció a una P<0.05 y una correlación mayor de 0.7 se consideró como una relación positiva entre los resultados.

RESULTADOS

La correlación existente entre el grado de aglutinación y la concentración de semen determinada con fotómetro, utilizando un nivel de confianza del 95% (0.05), fue de -0.058, con un valor P de 0.719, lo que determina que la relación entre estas dos variables como una correlación negativa débil, no lineal (figura 1). libres.

Correlación entre el grado de aglutinación y su lectura de concentración en semen de cerdo utilizando tres métodos analíticos Correlacion grado aglutinacion 1
Figura 1. Correlación de Pearson de aglutinación y concentración espectrofotómetro= -0.058 Valor P = 0.719
Correlación entre el grado de aglutinación y su lectura de concentración en semen de cerdo utilizando tres métodos analíticos Correlacion grado aglutinacion 2
Figura 2. Correlación de Pearson de aglutinación y concentración Neubawer = -0.002
Correlación entre el grado de aglutinación y su lectura de concentración en semen de cerdo utilizando tres métodos analíticos Correlacion grado aglutinacion 3
Figura 3. Correlación de Pearson de aglutinación y concentración CASA = -0.155 Valor P = 0.332

CORRELACIONES:

AGLUTINACIÓN, CONCENTRACIÓN NEUBAWER

Lo mismo encontramos cuando comparamos las variables aglutinación con la concentración empleando el método de Neubawer, con una correlación de -0.002 el valor de P es de 0.989, es mayor al nivel de significancia que se maneja. Existe una correlación negativa débil entre las variables, pero no significancia y no lineal (figura 2). Figura 2. Correlación de Pearson de aglutinación y concentración Neubawer = -0.002 Valor P = 0.989

CORRELACIONES:

AGLUTINACIÓN, CONCENTRACIÓN CASA

Para la correlación existente entre la aglutinación y la concentración del semen utilizando el sistema CASA, encontramos una correlación de = -0.155 con un Valor P = 0.332 (figura 3). Esto significa que existe una relación entre variables y es significativa, aunque no lineal, porque el valor p es menos al nivel de significancia que se manejan.

CONCLUSIÓN

En la investigación realizada en este proyecto se obtuvieron varios resultados de acuerdo con las diferentes pruebas a las que fueron sometidas las muestras de semen que se recolectó para medir los niveles de aglutinación (Cámara de Neubawer, espectrofotómetro, CASA). Con estos resultados y con varias pruebas estadísticas se llegó a la conclusión de que según el método de Correlación de valor P el método CASA fue el único que tiene una relación entre variables y aunque no resultó lineal se encontró un nivel de significancia de acuerdo con los parámetros que se fueron evaluando para medir la aglutinación. Los resultados fueron diferentes de acuerdo con el método al que fue expuesta cada muestra.

BIBLIOGRAFIA:

• Baes Lougan M. (2017, October). Manual de cría y manejo técnico de ganado criollo porcino. https://cenida.una.edu.ni/Tesis/tnl01b141.pdf

• Cortez, S, Azana, S. (2021). Análisis de la aglutinación espermática en el seminograma. https://www.reproduccionasistida.org/analisis- de-la-aglutinacion-de-los-espermatozoides/

• Fabricio, L., & Vera, M. (n.d.). Escuela Superior Politécnica Agropecuaria de Manabí Manuel Félix López. Carrera Pecuaria Tesis previa a la obtención del Título de Médico.

• Mortimer, D. (2000). Sperm Preparation Methods. Journal of Andrology, 21(3), 357–366. https://doi.org/10.1002/J.1939-4640.2000.TB03390.X

• Valle Rodríguez, D. (2017). Evaluación de la calidad espermática de sementales porcinos utilizados en la monta natural-Evaluation of boar sperm quality for natural mating. http://www.veterinaria.org/revistas/ redvet2017Volumen18No10-
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/ n101017.html

Artículo publicado en “Los Porcicultores y su Entorno Noviembre Diciembre 2024

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