Dr. Víctor Hugo Severino-Lendechy
Dr. Mateo Itza-Ortiz
Dra. Angélica Escárcega-Ávila
Dr. Ernesto Orozco-Lucero
Dr. José Carrera-Chávez
RESUMEN
El objetivo fue evaluar la funcionalidad reproductiva de toros de raza criolla mediante la evaluación seminal de semen fresco y postcongelado. Se realizó la colecta de semen con un electroeyaculador a 10 toros de raza Longhorn. Los toros tenían una edad y peso promedios de 3.2±0.7 años y 486.1±33.0 kg, respectivamente. Las características evaluadas fueron peso corporal (PC), circunferencia escrotal (CE), volumen del eyaculado (VE), concentración espermática (CEsp), motilidad masal (MM), motilidad progresiva (MP), pH, viabilidad y anormalidades totales (AT).
El semen se criopreservó y posteriormente se evaluó la motilidad progresiva postcongelado (MPP). Los datos fueron analizados mediante una correlación múltiple. El PC estuvo correlacionado (P<0.05) con la viabilidad espermática y el porcentaje de AT; CE con VE, MM con MP, viabilidad, pH y AT; MP con viabilidad de los espermatozoides, AT y MPP; mientras que viabilidad se correlacionó con AT y MMP; y AT con MPP. En conclusión, el semen de los toros Longhorn se podría criopreservar para su conservación y difusión.
INTRODUCCIÓN
Los primeros bovinos que llegaron al continente americano y a México, se introdujeron hace aproximadamente 500 años en diferentes áreas ecológicas durante la conquista (Ulloa-Arvizu et al., 2008; Villalobos et al., 2009; De Alba, 2011). El nombre común para este ganado es “criollo” debido a que son descendientes de los originalmente traídos de Europa (Bos taurus) los cuales se adaptaron a las condiciones medioambientales adversas de las regiones donde se ubicaron, desarrollando tolerancia a la estacionalidad de la producción forrajera, longevidad, docilidad, resistencia a enfermedades (De Alba, 2011; Florio et al., 2011) y ectoparásitos (González-Cerón et al., 2009); se reprodujeron en diferentes regiones agroecológicas de América (Fernández y Barba, 2005; Villalobos et al., 2009; De Alba, 2011) en poblaciones pequeñas sujetas a la selección natural (Ulloa-Arvizu et al., 2008; De Alba, 2011; Vilaboa-Arroniz et al., 2012b).
Actualmente, en América Latina y el Caribe, los bovinos criollos se encuentran distribuidos en diferentes regiones y países, en sistemas de producción para leche o carne, desde zonas muy bajas como el trópico húmedo hasta los ecosistemas Andinos, donde han evolucionado y por lo cual poseen genes únicos para el ambiente específico (De Alba, 2011). Algunos ejemplos de razas criollas y regiones donde han evolucionado son: ganado Caracú en Brasil; Limonero y Llanero en Venezuela; Harton del Valle, Romosinuano, Blanco Orejinegro y San Martinero en Colombia; ganado Reyna en Nicaragua; Barroso Salmeco en Guatemala; Criollo Dominicano en República Dominicana y, el Chinampo, Frijolillo, Mixteco, Coreño, Nunkini, Criollo de Rodeo, Criollo Lechero Tropical y Romosinuano en México (De Alba, 2011; DAD-IS, 2011). En México, estos bovinos criollos, son conocidos como Chinampo, Frijolillo, Mixteco, Coreño, Nunkini, Criollo de Rodeo, Criollo Lechero Tropical y Romosinuano que han sido seleccionados de forma natural a las condiciones del trópico (DAD-IS, 2011).
Lamentablemente, la mayoría de las poblaciones de ganado criollo en el continente y en México se conforman y desarrollan en hatos pequeños (≤ 20 animales), bajo pastoreo extensivo y en sistemas de producción familiar (Tewolde, 2005; Ulloa-Arvizu et al., 2008; De Alba, 2011; Florio et al., 2011; Vilaboa-Arroniz et al., 2013). Adicionalmente, esta raza es poco utilizada y su población presenta una tendencia a disminuir y la posiciona en peligro de extinción, debido principalmente a su bajo inventario representa el 0.005% del inventario bovino nacional y el 0.05% en comparación con el Estado que cuenta con mayor número de bovinos (Veracruz, 3’681,925 bovinos), además que no se tienen estadísticas de su aportación a la producción nacional (Vilaboa et al., 2011a,b).
Es importante mencionar que, esta raza criolla está siendo progresivamente sustituidos por razas comerciales mejoradas y/o especializadas en producción de carne y leche; esto aunado al desconocimiento y falta de difusión de la raza (Vilaboa-Arroniz et al., 2012a,b; Vilaboa-Arroniz et al., 2013). Un ejemplo de estos bovinos criollos son los conocidos como Longhorn.
La conservación de los recursos zoogenéticos con fines de preservación de la biodiversidad y variedad genética en armonía con las diversas condiciones agroecológicas y de sistemas de manejo de una zona específica; tiene importancia económica, científica y social (Vejarano et al., 2005; Florio et al., 2011). No obstante, la capacidad reproductiva de las razas bovinas criollas no está totalmente definida, por tal motivo, los estudios andrológicos son de gran importancia para conocer el estado reproductivo de toros que pudieran funcionar como diseminadores de germoplasma de razas criollas, empleándose en programas de inseminación artificial. Por lo tanto, el objetivo fue evaluar la funcionalidad reproductiva de toros de raza criolla Longhorn mediante la evaluación seminal de semen fresco y postcongelado.
MATERIALES Y MÉTODOS
Ubicación geográfica de las unidades de producción
El estudio se realizó en una unidad de producción ubicada en la localidad de Villahermosa, Tabasco, México, situada a 17°59′13″ y 92°55′10″, a una altura de 9 msnm, con clima cálido húmedo, con temperatura y precipitación media anual de 26°C y 2,250 mm, respectivamente (INEGI, 2019).
Características de los animales experimentales
Se evaluaron andrológicamente 10 toros de la raza Longhorn con una edad promedio de 3.2±0.7 años, un peso corporal de 486.1±33.0 kg, y una condición corporal de 5.5±0.5 en escala de 1 a 9 (Richards et al., 1989). Un mes antes de la colecta del semen, los toros fueron separados de las vacas. Fueron desparasitados interna con Levamisol en dosis de 1 mL/20 kg de peso vía IM y externamente y con Bayticol® Pour-on 1%, en dosis 10 mL/100 kg de peso vía tópica, se vitaminaron con Vigantol® ADE en dosis 5 ml vía IM y vacunados contra derriengue (Nobivac® Rabia, Lab. Intervet, dosis 2 ml vía IM), fiebre carbonosa (vacuna anticarbonosa, Lab. MSD, dosis 1 ml vía SC) y carbón sintomático (Bacterina triple C.E.S.®, Lab. MSD, dosis 5 ml vía IM). Los animales muestreados se identificaron con un número de arete y de forma visual fueron examinaron físicamente para descartar patologías o defectos físicos.
Colecta de semen
Antes de recolectar el semen, los toros se sometieron a un lavado prepucial externo (con agua y jabón neutro) e interno (Gentamicina – tilosina en 0.9% NaCl); se recortaron los pelos del prepucio y se realizó un masaje transrectal de las glándulas accesorias durante 1 minuto. La eyaculación se realizó mediante electroeyaculación (ElectroJac 5®). Posteriormente, eyaculado se llevó inmediatamente al laboratorio, y se puso a baño maría a 37°C y se realizaron las evaluaciones seminales macroscópicas y microscópicas. La colecta del semen se realizó una sola vez por toro. Es importante mencionar que el eyaculado que presentó un color amarillento, rojizo o pardo, así como aquellas que tuviesen un olor extraño, diferente al característico, que indicara alguna contaminación, con orina o alguna secreción derivada de una patología genitourinaria, fue descartado del experimento.
Procesamiento, dilución y congelación del semen
El número de espermatozoides viables en el eyaculado fue calculado por la siguiente ecuación:
Espermatozoides Viables = CEsp × VE × MP × células normales.
Donde:
CEsp= Concentración espermática.
VE= Volumen de eyaculado.
MP= Motilidad progresiva.
Después, se calculó el número de dosis potenciales, para lo cual, se consideró una concentración de 30×106 espermatozoides/pajilla.
La ecuación fue:
Número de dosis = Viabilidad / Número de células por dosis.
Para la cantidad de diluyente se empleó la ecuación:
Cantidad de diluyente= No. de dosis × volumen pajilla – VE.
El semen se diluyó en una proporción 1:1, utilizando un diluyente comercial Optidyl® (Cryo-Vet, Francia) y calentado a baño María (37°C). Posteriormente, se procedió a envasar el semen en pajillas de 0.5 ml (pajillas Cassou IMV® Technologies, Francia) sellándolas con alcohol polivinílico y dejándolas en un refrigerador (5°C) durante 5 h.
Se colocaron las pajillas en gradilla de distribución a vapor de nitrógeno líquido durante 10 min hasta alcanzar -140°C, lo cual fue verificado y controlado con un termómetro digital (Multilogger Thermometer, Model HH506RA, Omega Engineering). Pasado este tiempo, las pajillas fueron colocadas en goblets y bastones para que finalmente se vertieran en nitrógeno líquido a -196°C y ser almacenadas.
Variables de estudio
Las variables evaluadas fueron, peso corporal (PC) que fue medido usando una báscula mecánica (REVUELTA®, Modelo RGI-15C-DVZ), previo a la colecta de semen. Circunferencia escrotal (CE) se medió siguiendo la metodología proporcionada por la Sociedad Americana de Teriogenología Veterinaria (SATV) para el Estudio de la Evaluación Reproductora, midiéndose la CE usando una cinta escroto-testicular (Implegan® Modelo Coulter, Colombia). El volumen de eyaculado (VE) fue medido (ml) usando observación directa sobre el tubo colector graduado utilizado para la colecta del eyaculado.
El pH del semen fue medido usando 5μL de la muestra colectada y se introdujo una tira reactiva (Macherey-Nagel® PH-Fix 0-14), para después realizar la lectura. Motilidad masal (MM) se evalúo usando 10μL de la muestra colectada y se colocó en un portaobjeto a 37°C. La MM se determinó de manera subjetiva dándole un valor en porcentaje de 0 a 100%, con un microscopio óptico (Primo Star®, Carl Zeiss, Alemania), a 100X, valorando el movimiento de las células espermáticas en conjunto (Carballo-Guerrero et al., 2009; Crespo y Quintero-Moreno, 2014).
Motilidad progresiva (MP) se realizó de manera subjetiva (0-100%), usando 5μL de semen que fue colocado en un portaobjeto a 37°C, observándose el porcentaje de células con movimiento rectilíneo progresivo del total de espermatozoides (100 espermatozoides) observados en cuatro campos microscópicos a 100X (Carballo-Guerrero et al., 2009; Crespo y Quintero-Moreno, 2014). Concentración espermática (CEsp) fue calculada utilizando una cámara de recuento celular Neubaüer (Boeco®, Alemania), realizándose una dilución del semen de 1:200.
Para la dilución se tomaron 30 μL de semen, el cual se diluyó en 6 mL de una solución espermicida previamente preparada (9 g de cloruro de sodio, 3 mL de formol en 1000 mL de agua destilada). Una vez hecha la dilución, se esperó tres minutos para garantizar que los espermatozoides murieran, y posteriormente se tomó 10μL del semen diluido y se llenó la cámara de Neubaüer para realizar el conteo celular con un microscopio óptico a 100X (Crespo y Quintero-Moreno, 2014). El conteo de las cabezas de los espermatozoides se realizó en cinco cuadros (cuadros de las esquinas y central) aplicando la siguiente ecuación:
Espermatozoides/mL= (espermatozoides contados/superficie contada (mm2) × profundidad de la cámara (mm) × dilución) × 1000.
Viabilidad y anormalidades espermáticas totales (AT) y porcentaje de viabilidad espermática (VI), estas variables fueron obtenidas usando 10μL de semen fresco y se colocó en un portaobjeto a 37°C, mezclándola con una cantidad igual de colorante (Eosina-Nigrosina), se homogeneizo, y se hizo un frotis que se dejó secar por 30 min. La muestra teñida, se observó al microscopio a 100X y se cuantificó un total de 100 espermatozoides vivos (espermatozoides blancos) y muertos (espermatozoides rojos).
Posteriormente, del mismo frotis se procedió a contar el número de espermatozoide con anormalidades (primarias y secundarias) (Crespo y Quintero-Moreno, 2014). La motilidad progresiva postcriopreservación (MPP) se midió 24 horas después de criopreservado el semen, se emplearon 10 pajillas por toro muestreado seleccionadas al azar para su evaluación. Las pajillas fueron descongeladas a 37°C por 30 segundos. Posteriormente, se extrajo el semen, y se realizó la evaluación de la MP, mediante la metodología descrita para la MP del semen fresco.
Análisis estadístico
Las variables fueron analizadas usando una correlación múltiple de las características del semen evaluadas, utilizando el paquete estadístico SPSS (Statistical Package for Social Sciences V. 15).
RESULTADOS
Las variables seminales se presentan en la Tabla 1. Se encontraron correlaciones significativas positivas de PC con CE, VI y negativa con AT, y de CE con VE. Entre las características de calidad del semen, MM tuvo una correlación positiva con MP, VI, pH y de manera negativa con AT. Por su parte, MP estuvo correlacionada positivamente con VI y MPP, y negativamente con AT; mientras que la VI se correlacionó negativamente con AT y positivamente con MPP; y AT con negativamente con MPP.
Tabla 1. Correlaciones parciales entre peso corporal, circunferencia escrotal y características seminales de toros Longhorn. |
||||||||||
Variables |
CE |
VE |
CEsp |
MM |
MP |
VI |
pH |
AT |
MPP |
|
PC |
0.354** |
0.029 |
0.021 |
0.045 |
0.127 |
0.263* |
0.010 |
-0.258* |
0.144 |
|
CE |
0.270* |
0.082 |
-0.077 |
-0.181 |
-0.089 |
-0.179 |
0.073 |
0.036 |
||
VE |
0.029 |
0.042 |
-0.102 |
-0.174 |
-0.180 |
0.151 |
-0.061 |
|||
CEsp |
0.129 |
0.036 |
0.218 |
0.239 |
-0.178 |
0.030 |
||||
MM |
0.589** |
0.566** |
0.259* |
-0.593** |
-0.018 |
|||||
MP |
0.976** |
0.136 |
-0.969** |
0.302* |
||||||
VI |
0.233 |
-0.951** |
0.293* |
|||||||
pH |
-0.209 |
-0.016 |
||||||||
AT |
-0.327* |
|||||||||
(P<0.01)** y (P<0.05)* Diferencia estadística significativa. PC= Peso corporal; CE= Circunferencia escrotal; VE= Volumen eyaculado; CEsp= Concentración espermática; MM= Motilidad masas; MP= Motilidad progresiva; VI= Viabilidad espermática; AT= Anormalidades totales; MPP= Motilidad progresiva postcongelación. |
DISCUSIÓN
El PC de los toros tuvo una correlación positiva con CE y negativa con AT, mientras que CE se correlacionó positivamente con VE, indicando que los animales más pesados tienen testículos más grandes y tienden a producir mayor volumen seminal con más espermatozoides viables y menor porcentaje de AT. Según Delgado et al. (2000); Martínez et al. (2000), la CE en los toros es un predictor de las características seminales, ya que existe una correlación positiva entre la CE, VE y CEsp, señalando la influencia del tamaño y volumen de los testículos en los parámetros físicos de la eyaculación (Delgado et al., 2000; Martínez et al., 2000; Crespo y Quintero-Moreno, 2014).
Sin embargo, en el presente estudio, no se observaron correlaciones significativas de PC y CE con las características seminales del semen fresco o la MPP. Resultados similares fueron encontrado por Teixeira et al. (2011), en el toro criollo Curraleiro, mencionando que, las mediciones testiculares estuvieron correlacionadas con VE y que los toros con mayor peso corporal tuvieron testículos más grandes y produjeron semen de mayor calidad con un mayor porcentaje de espermatozoides normales. A diferencia de Martínez et al. (2000), que encontraron una correlación negativa entre la CE y la VI.
CONCLUSIONES
Se concluye que el semen de los toros criollos Longhorn puede ser criopreservado para su conservación y difusión en México. Se encontró asociación entre PC y CE, y entre MM, MP y AT.
LITERATURA CITADA
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