MATERIALES Y MÉTODOS
Potentes herramientas para monitorear la Enfermedad Asociada a Circovirus Porcino (PCVAD).
Maartje Wilhelm Dvm
Eric Van Esch Dvm
Tim Goode
Alex Eggen Dvm.
BioChek
INTRODUCCIÓN
Es importante detectar y cuantificar el Circovirus Porcino tipo 2 (PCV2) en cerdos infectados clínica y subclínicamente. El PCV2, incluso en pequeñas cantidades, tiene un efecto perjudicial sobre el rendimiento. Una ganancia de peso diaria promedio (ADWG) más baja y una tasa de conversión de alimento (FCR) menos eficiente son los principales responsables del daño económico(1).
Para monitorear la enfermedad asociada a PCV2 (PCVAD), se han desarrollado pruebas de ELISA y qPCR. Tanto IPMA como ELISA detectan anticuerpos neutralizantes de virus (VN) y controlan la viremia de PCV2(2). La viremia de PCV2 se monitorea mediante qPCR. Ambos ensayos son desarrollados y producidos por BioChek y probados para determinar su idoneidad respectiva.
MATERIALES Y MÉTODOS
La prueba de ELISA para PCV2 se usa típicamente para determinar la presencia y el título de anticuerpos derivados de la madre (MDA), la seroconversión después de la vacunación o la infección por virus de campo, para verificar la uniformidad de la inmunidad y determinar el momento correcto de vacunación.
El qPCR para PCV2 se utiliza para verificar la presencia y la cantidad (carga viral) del virus. La prueba de ELISA para PCV2 de BioChek se comparó con otras pruebas presentes en el mercado y con la prueba IPMA, que es el estándar de oro para la detección de anticuerpos contra PCV2, y se utilizaron muestras de suero bien definidas(3). El qPCR para PCV2 de BioChek participó en un Programa de Prueba de Competencia interlaboratorio (PTS), organizada por la organización GD Animal Health Service, Deventer, Países Bajos.
En esta PTS se incluyeron 8 muestras liofilizadas diferentes y se dividieron en 3 grupos. El grupo con los números de muestra 1, 5 y 7 contenía cepas del virus de campo en diferentes diluciones. El grupo con los números de muestra 2 y 4 no contenía ningún virus (negativo o virus PCV tipo 1). El grupo con los números de muestra 3, 6 y 8 contenía una cepa diferente del virus en varias diluciones. Las 8 muestras diferentes se analizaron en los laboratorios BioChek BV en Reeuwijk, Países Bajos, usando un lote producido y liberado de forma rutinaria del kit de qPCR para PCV2 de BioChek.
Como parte del desarrollo del kit de qPCR, se analizaron diluciones en serie de PCV2. El kit incluye un estándar positivo para ayudar a los laboratorios de diagnóstico a verificar sus procedimientos internos.
RESULTADOS
El ELISA de BioChek mostró una excelente correlación con la prueba IPMA. Esto fue probado e informado por Pileri(3). La prueba PTS para el kit de qPCR reveló que el resultado de cada prueba individual coincidía con el resultado del líder del PTS. Las muestras números 2 y 4 (sin virus PCV2) obtuvieron resultados negativos en el kit de BioChek. Confirmando la especificidad declarada de >99%.
Las muestras positivas al virus (1, 5 y 7) obtuvieron una puntuación positiva en BioChek. El núme ro 5 estaba muy diluido; la muestra 7 contenía un poco menos de virus que la número 1. Esto se reflejó en los valores de Cq, 5 tuvo el valor de Cq más alto, mientras que 7 fue apenas superior a 1. Para las muestras positivas números 3, 6 y 8 se observó un patrón similar, encontrando: Alta dilución – alto valor de Cq.
Se demostró alta sensibilidad (alta dilución y todavía positivo) y buena linealidad. La prueba de diluciones en serie del virus PCV2 reveló el mismo nivel de linealidad que se observó en la prueba PTS y una sensibilidad de tan solo 2,8 en una escala log10 en copias virales por ml de suero(4), que es incluso más sensible que una PCR para PCV2 normal. También se puede observar la buena linealidad entre las muestras en diferentes diluciones (figura 1).
En la figura 2 se muestran los resultados de la prueba de diferentes lotes del estándar PCV2 incluido en el kit de BioChek. Se encontró una excelente similitud entre las muestras provenientes de diferentes lotes de controles positivos.
DISCUSIÓN
PCVAD puede controlarse eficazmente mediante la vacunación. La eficacia de la vacunación depende de la inmunidad inducida por la vacuna. Los anticuerpos neutralizantes son la primera línea de defensa. Cuando no se observa seroconversión tras la vacunación y se detecte viremia por PCV2, se debe reconsiderar el esquema de vacunación. El objetivo de la vacunación contra PCV2 es criar cerdos que no sufran PCVAD. Para monitorizar la eficacia de la vacunación se necesita la información combinada de seroconversión obtenida por ELISA y viremia de PCV2 por qPCR. Las ganancias financieras pueden ser significativas(5).
REFERENCIAS
- Segales J, Porcine Circovirus type 2 (PCV2) infections: Clinical signs, pathology and laboratory diagnosis. Virus Research 164 (2012) 10 -19
- Fort et al. One dose of a porcine circovirus 2 (PCV2) sub-unit vaccine administered to 3-weekold conventional piglets elicits cell-mediated immunity and significantly reduces PCV2 viremia in an experimental model, Vaccine 27 (2009) 4031 – 4037.
- Pileri et al. Comparison of the immune-peroxidase monolayer assay and three commercial ELISAs for detection of antibodies against porcine circovirus type 2. Vet Journal 2014.
- Data on file BioChek laboratories.
- Atlagich et al. AASV 2014, ESPHM 2014.
Artículo publicado en ” Los Porcicultores y su Entorno Julio Agosto 2023“
